2型糖尿病患者脂肪源性间充质干细胞对小鼠压疮创面愈合的影响

摘要：目的 探讨2型糖尿病患者脂肪源性间充质干细胞(AMSC)对小鼠压疮创面愈合的影响. 方法 (1)2016年9月,取1例60岁女性2型糖尿病患者的皮下脂肪组织,采取胶原酶消化法提取AMSC培养,取第3代细胞用于后续实验.观察细胞形态,行成骨、成软骨、成脂诱导分化鉴定,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物CD90、CD105、CD73及CD34的表达(样本数为3).(2)取16只6～8周龄雌性C57BL/6野生型小鼠,采用磁铁压迫皮肤的方法在每只小鼠脊柱两侧各制成1个压疮创面,将每只小鼠的2个创面配对分为糖尿病AMSC组和阴性对照组,创面内分别注射100 μL磷酸盐缓冲液(PBS)悬浮的绿色荧光蛋白标记的糖尿病AMSC(1×106个)、100μLPBS.观察注射后21 d内2组创面的愈合情况并计算注射后5、13、17 d的创面愈合率.注射后11、21 d分别处死3只小鼠,每组切取3个创面组织,苏木精-伊红染色观察皮肤结构,Masson染色评估胶原沉积情况,免疫组织化学法计数CD31阳性表达即新生血管数.另取2组前述制备的注射后21 d创面组织标本,免疫组织化学法检测S100阳性细胞率即施万细胞新生情况.另取糖尿病AMSC组前述制备的注射后11d创面组织标本,采用荧光示踪法观察AMSC定植情况.对数据行配对t检验并进行Bonferroni校正. 结果 (1)从2型糖尿病患者皮下脂肪组织中分离培养的第3代细胞贴壁生长,多呈长梭形,呈旋涡状生长;经诱导后具有成骨、成软骨、成脂分化功能,细胞表面CD90、CD105、CD73阳性表达率高于90.00％,CD34表达率为0.46％.细胞鉴定为AMSC.(2)小鼠糖尿病AMSC组创面愈合较快,注射后17 d所有创面均完全愈合;而小鼠阴性对照组创面此时未完全闭合,表面仍有痂皮.注射后5、13、17 d,小鼠糖尿病AMSC组创面愈合率分别为(35.6±6.5)％、(87.1±2.5)％、100.0％,显著高于阴性对照组的(19.8±7.2)％、(66.2±5.2)％、(86.9±5.3)％(t=6.49、14.31、9.73,P＜0.05).与阴性对照组相比,小鼠糖尿病AMSC组创面组织注射后11 d炎性细胞浸润减少,注射后21 d可见较厚的表皮和真皮以及再生的皮肤附属器.注射后11、21d,小鼠糖尿病AMSC组创面组织胶原百分比分别为(48.3±1.3)％、(54.1±1.7)％,明显高于阴性对照组的(41.4±1.7)％、(50.3±1.2)％(t=6.98、3.99,P＜0.01).注射后11、21(d,小鼠糖尿病AMSC组创面组织新生血管数分别为(17.2±1.3)、(1 8.0±2.1)个,明显多于阴性对照组的(8.0±1.4)、(14.0±1.5)个(t =10.69、3.38,P＜0.01).注射后21d,小鼠糖尿病AMSC组创面组织S100阳性细胞率为(1.76±0.12)％,明显高于阴性对照组的(0.55±0.03)％(t=21.68,P＜0.001).注射后11d,小鼠糖尿病AMSC组创面组织仍有AMSC定植. 结论 2型糖尿病患者AMSC移植可通过促进血管再生、胶原沉积及施万细胞再生进而加快小鼠压疮创面愈合.