沉默Smad泛素化调节因子2基因对人增生性瘢痕成纤维细胞功能的影响

摘要：目的 探讨沉默Smad泛素化调节因子2(Smurf2)基因对人增生性瘢痕Fb分泌TGF-β1、α平滑肌肌动蛋白(d-SMA)、I型胶原的影响. 方法 取9例烧伤后增生性瘢痕患者的正常皮肤组织和瘢痕组织,用组织块法培养人正常皮肤Fb和增生性瘢痕Fb,将2种第3代Fb均按随机数字表法分成6组,每组9孔.空白对照组,不加任何小干扰RNA培养72 h;阴性对照组,转染非靶向的小干扰RNA培养72 h;Smurf2小干扰RNA转染组,转染100 nmol/L的Smurf2小干扰RNA培养72 h;空白对照+TGF-β1组,不加任何小干扰RNA培养72 h后加入10 ng/mL TGF-β1刺激6h;阴性对照+ TGF-β1组,转染非靶向的小干扰RNA培养72 h后加入10 ng/mL TGF-β1刺激6 h;Smurf2小干扰RNA转染+TGF-β1组,转染Smurf2小干扰RNA培养72 h后加入10 ng/mL TGF-β1刺激6h.(1)分别采用蛋白质印迹法、RT-PCR法检测2种细胞空白对照组、阴性对照组、Smurf2小干扰RNA转染组Smurf2的蛋白和mRNA表达.(2)采用ELISA法检测2种细胞空白对照组和Smurf2小干扰RNA转染组细胞培养上清液中TGF-β1含量.(3)采用蛋白质印迹法检测2种细胞6组α-SMA的蛋白表达,ELISA法检测2种细胞6组细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量.(4)采用RT-PCR法检测2种细胞6组α-SMA和Ⅰ型胶原的mRNA表达.以上实验中各组样本数均为9.对数据行析因设计方差分析、Bonferroni法检验. 结果 (1)2种细胞Smurf2小干扰RNA转染组中Smurf2的蛋白和mRNA表达量均明显低于空白对照组和阴性对照组(P值均小于0.05),空白对照组和阴性对照组中Smurf2的蛋白和mRNA表达量均相近(P值均大于0.05).(2)增生性瘢痕Fb空白对照组和Smurf2小干扰RNA转染组细胞培养上清液中TGF-β1含量分别为(4.34±0.56)、(2.14±0.28) pg/mL,均明显高于正常皮肤Fb的(1.52±0.20)、(1.41±0.18) pg/mL(P值均小于0.05).增生性瘢痕Fb中,Smurf2小干扰RNA转染组细胞培养上清液中TGF-β1含量明显低于空白对照组(P＜0.05);正常皮肤Fb中,Smurf2小干扰RNA转染组细胞培养上清液中TGF-β1含量与空白对照组相近(P＞0.05).(3)2种细胞空白对照+ TGF-β1组α-SMA蛋白表达量和细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量均明显高于空白对照组(P值均小于0.05),阴性对照+TGF-β1组α-SMA蛋白表达量和细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量均明显高于阴性对照组(P值均小于0.05),Smurf2小干扰RNA转染组α-SMA蛋白表达量和细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量均与空白对照组和阴性对照组相近(P值均大于0.05),Smurf2小干扰RNA转染+TGF-β1组α-SMA蛋白表达量和细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量均明显低于空白对照+ TGF-β1组和阴性对照+TGF-β1组(P值均小于0.05).(4)2种细胞空白对照+TGF-β1组α-SMA和Ⅰ型胶原的mRNA表达量均明显高于空白对照组(P值均小于0.05),阴性对照+TGF-β1组α-SMA和Ⅰ型胶原的mRNA表达量均明显高于阴性对照组(P值均小于0.05),Smurf2小干扰RNA转染组α-SMA和Ⅰ型胶原的mRNA表达量均与空白对照组和阴性对照组相近(P值均大于0.05),Smurf2小干扰RNA转染+TGF-β1组d-SMA和Ⅰ型胶原的mRNA表达量均明显低于空白对照+ TGF-β1组和阴性对照+TGF-β1组(P值均小于0.05). 结论 沉默人增生性瘢痕Fb中Smurif2基因,可减少TGF-β1的自分泌及抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达和Ⅰ型胶原合成.