同种异体骨髓间充质干细胞对脓毒症大鼠腹腔巨噬细胞极化改变的影响

摘要：目的 探讨同种异体骨髓间充质干细胞(BMSC)对LPS诱导的脓毒症大鼠腹腔巨噬细胞极化改变的影响. 方法 (1)取5只SD大鼠,采用全骨髓贴壁法分离纯化培养BMSC,取第3代细胞行形态学观察,流式细胞仪检测干细胞表面标志物CD29、CD44、CD45、CD90的表达,并进行成骨细胞、成脂肪细胞诱导分化鉴定.(2)取45只SD大鼠,按随机数字表法分为假伤组5只、LPS对照组20只、BMSC治疗组20只.对LPS对照组、BMSC治疗组大鼠予尾静脉按5 mg/kg注射LPS致脓毒症,假伤组大鼠注射等量的生理盐水模拟致伤.伤后1h,BMSC治疗组大鼠另予尾静脉注射1 mLBMSC(2×106个/mL),另2组大鼠注射等量PBS.假伤组大鼠于伤后24 h,LPS对照组、BMSC治疗组于伤后6、12、24、48 h各取5只大鼠处死后取肺组织行HE染色观察病理变化.假伤组伤后24 h的大鼠与LPS对照组、BMSC治疗组伤后24、48 h的大鼠另同时通过腹腔注射低糖DMEM培养液后取腹腔液培养巨噬细胞.流式细胞仪检测假伤组伤后24 h,LPS对照组、BMSC治疗组伤后24、48 h大鼠腹腔巨噬细胞标志物CD68(用于设门)、CD11c、CD206阳性表达情况.对数据行单因素方差分析、LSD检验. 结果 (1)分离培养的第3代贴壁细胞形态呈均一纤维样,与Fb相似;CD29、CD44、CD90呈阳性表达,CD45呈弱阳性表达;诱导后细胞可分化为成骨细胞和成脂肪细胞,鉴定为BMSC.(2)伤后24 h,假伤组大鼠肺泡结构清晰、完整,无充血或炎性细胞浸润.伤后6h,LPS对照组、BMSC治疗组大鼠肺泡结构清晰,少量炎性细胞浸润,肺组织轻微充血,肺间质稍增厚.伤后12 h,LPS对照组大鼠肺组织较BMSC治疗组炎症反应明显,可见大量炎性细胞浸润,肺组织充血,肺间质明显增厚;而BMSC治疗组大鼠与伤后6h情况基本一致.伤后24 h,LPS对照组、BMSC治疗组大鼠肺组织病理改变较伤后12h无明显变化.伤后48 h,LPS对照组大鼠肺泡组织结构仍严重破坏,大量炎性细胞浸润,肺组织充血,肺间质增厚情况较前稍有减轻;而BMSC治疗组大鼠基本恢复至假伤组水平.(3)伤后24 h,LPS对照组、BMSC治疗组大鼠腹腔巨噬细胞CD11c阳性表达率分别为(83±10)％和(87±7)％,二者相近(p＞0.05),且均明显高于假伤组的(55±12)％(P值均小于0.01).LPS对照组伤后48 h大鼠腹腔巨噬细胞CD11c阳性表达率[(59±1 1)％]与假伤组伤后24 h相近(P＞0.05),且均高于BMSC治疗组伤后48 h的(20±1 1)％(P值均小于0 01).伤后24 h,3组大鼠腹腔巨噬细胞CD206阳性表达比相近(p值均大于0.05).假伤组伤后24 h和BMSC治疗组伤后48 h大鼠腹腔巨噬细胞CD206阳性表达比相近(P＞0.05),且均低于LPS对照组伤后48 h(P值均小于0.01). 结论 BMSC可减轻脓毒症大鼠肺组织的炎症反应,并且能够抑制腹腔巨噬细胞向Ⅰ型巨噬细胞极化,尚不能促使巨噬细胞向Ⅱ型巨噬细胞极化.