钠氢交换蛋白1抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用及其机制

摘要：目的 观察钠氢交换蛋白I(NHE1)抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用,并初步探讨其可能机制. 方法 取SD大鼠90只,按照随机数字表法分为对照组、单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组,每组30只.单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组大鼠背部建立20％ TBSAⅢ度烫伤(下称烧伤)模型后,背部创面中心注射2×105 CFU/mL的铜绿假单胞菌ATCC 27853菌液50 μL.烧伤脓毒症模型建立成功后,NHE1抑制剂组大鼠迅速腹腔注射0.1 mmol/L NHE1抑制剂卡立泊来德0.4 mg/kg,单纯脓毒症组大鼠注射同体积的生理盐水.对照组大鼠除不制作烧伤创面和接种细菌外,其余操作与单纯脓毒症组大鼠相同.烧伤脓毒症大鼠在伤后12 h剖腹,于回肠远端注射0.1 mol/L异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖200 mL,30 min后左心室采血,切取回肠末端组织.荧光分光光度计检测大鼠血清FITC-葡聚糖含量(样本数为10),HE染色观察肠道组织形态(样本数为10),ELISA法检测血清和肠道组织IL-6和TNF-α含量(样本数均为20),比色法检测血清和肠道组织髓过氧化物酶(MPO)活性(样本数均为20),蛋白质印迹法检测肠道组织NF-κB-p65蛋白表达及MAPK信号通路相关蛋白p38MAPK、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)以及c-Jun氨基末端激酶1/2(JNKl/2)磷酸化水平(样本数为4).对照组大鼠于相同时相点同前采集标本进行相关检测.对数据行单因素方差分析、SNK检验. 结果 (1)单纯脓毒症组大鼠血清FITC-葡聚糖含量较对照组明显升高(P＜0.01),NHE1抑制剂组大鼠血清FITC-葡聚糖含量则较单纯脓毒症组显著降低(P＜0.01).与对照组比较,单纯脓毒症组大鼠肠黏膜可见大量炎性细胞浸润、黏膜溃疡以及黏膜坏死;NHE1抑制剂组大鼠肠道损伤情况较单纯脓毒症组有显著好转.(2)单纯脓毒症组大鼠血清IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(387±42)、(164.7±10.1)ng/mL及(7.5±1.5)U/mL,显著高于对照组的(75±17)、(13.1 ±6.5)ng/mL和(2.3±0.7) U/mL(P值均小于0.01);NHE1抑制剂组大鼠血清IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(176±37)、(64.9±9.3) ng/mL和(5.9±0.8) U/mL,均显著低于单纯脓毒症组(P值均小于0.01).(3)单纯脓毒症组大鼠肠道组织IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(190±13)、(172.8±29.7) ng/mL及(8.7±1.5)U/mL,显著高于对照组的(20±3)、(11.9±2.3)ng/mL和(2.9±0.3)U/mL(P值均小于0.01);NHE1抑制剂组大鼠肠道组织IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(35±6)、(45.2 ±6.1)ng/mL和(5.3±0.6) U/mL,均显著低于单纯脓毒症组(P值均小于0.01).(4)单纯脓毒症组大鼠肠道组织NF-κB-p65蛋白表达量和p38MAPK、ERK1/2磷酸化水平显著高于对照组(P值均小于0.01),NHE1抑制剂组大鼠肠道组织NF-κB-p65蛋白表达量和p38MAPK磷酸化水平明显低于单纯脓毒症组(P值均小于0.01),3组大鼠肠道组织JNK1/2磷酸化水平无明显差异(P值均大于0.05). 结论 抑制NHE1可显著减轻烧伤脓毒症诱导的大鼠肠道损伤,其机制可能为通过调控NF-κB及p38MAPK信号通路,抑制肠道炎症反应.