乌司他丁对严重烧伤大鼠脾脏免疫功能的影响及机制

摘要：目的 观察乌司他丁对严重烧伤大鼠脾脏CD4+T淋巴细胞和CD4+ CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)免疫功能及外周血高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)含量的影响,并分析其可能机制.方法 将96只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假伤组、单纯烧伤组和乌司他丁组,每组32只.假伤组大鼠背部浸入37℃温水中12s模拟致伤;单纯烧伤组、乌司他丁组大鼠背部浸入94℃热水中12s,造成30％ TBSAⅢ度烫伤(以下称烧伤).各组大鼠伤后即刻起腹腔注射生理盐水40 mL/kg,乌司他丁组大鼠同时腹腔注射乌司他丁4×104 U/kg,每隔12小时注射1次,持续至伤后72 h.于伤后1、3、5、7d,每组各取8只大鼠采集腹主动脉血,采用ELISA法检测血清HMGB1含量,随即处死大鼠取脾脏组织,分选CD4+ CD25+ Treg和CD4+T淋巴细胞.采用流式细胞仪检测CD4+ CD25+ Treg中细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、叉头翼状螺旋转录因子p3(Foxp3)阳性表达率,采用ELISA法检测CD4+ CD25+ Treg培养上清液中IL-10含量;采用ELISA法检测CD4+T淋巴细胞培养上清液中IL-2、IL4和γ干扰素含量,采用酶标仪测定CD4+T淋巴细胞增殖活性,各组各时相点样本数为8.对数据行析因设计方差分析和LSD检验. 结果 (1)与假伤组比较,单纯烧伤组大鼠伤后1～7d血清HMGB1含量明显增加(P值均小于0.01).与单纯烧伤组比较,乌司他丁组大鼠伤后1～7d血清HMGB1含量明显减少(P值均小于0.01).(2)与假伤组比较,单纯烧伤组大鼠伤后1～7 d CD4+ CD25+ Treg中CTLA-4、Foxp3阳性表达率及细胞培养上清液中IL-10含量明显升高或增加(P值均小于0.01),于伤后3d达大值,分别为(65±10)％、(76±10)％、(28.2 ±4.4)pg/mL,此时假伤组大鼠该3项指标分别为(45±7)％、(46±7)％、(11.2±2.3) pg/mL.与单纯烧伤组比较,乌司他丁组大鼠伤后1 ～7 d CD4+ CD25+Treg中CTLA-4、Foxp3阳性表达率及细胞培养上清液中IL-10含量明显降低或减少(P ＜0.05或P＜0.01),分别于伤后7、1、7d达低值[(43±6)％、(50±8)％、(12.4±3.4) pg/mL],此时单纯烧伤组大鼠该3项指标分别为(58±8)％、(71±9)％、(19.7±2.8) pg/mL.(3)与假伤组比较,单纯烧伤组大鼠伤后1～7 dCD4+T淋巴细胞培养上清液中IL-2和γ干扰素含量明显减少、IL-4含量明显增加(P值均小于0.01).与单纯烧伤组比较,乌司他丁组大鼠伤后1 ～7 d CD4+T淋巴细胞培养上清液中IL-2和γ干扰素含量明显增加、IL-4含量明显减少(P ＜0.05或P＜0.01).(4)与假伤组比较,单纯烧伤组大鼠伤后1～7 d CD4+T淋巴细胞增殖活性明显减弱(P值均小于0.01).与单纯烧伤组比较,乌司他丁组大鼠伤后1～7 d CD4+T淋巴细胞增殖活性明显增强(P值均小于0.01). 结论 乌司他丁可减弱严重烧伤大鼠脾脏CD4+ CD25+ Treg介导的免疫抑制功能,改善脾脏CD4+T淋巴细胞的分泌和增殖功能,原因可能为其抑制了体内HMGB1的大量释放.