过表达胶质细胞源性神经营养因子的脂肪源性间充质干细胞对大鼠电损伤坐骨神经的作用

摘要：目的 观察持续过表达胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的脂肪源性间充质干细胞(ADSC)对大鼠坐骨神经电刺激损伤后肢体运功功能恢复和神经修复的影响. 方法 取5只SD大鼠制备过表达GDNF的ADSC.取150只大鼠按照随机数字表法分为正常对照组、GDNF-ADSC组、ADSC组、GDNF组、生理盐水组5组,每组30只.正常对照组不作处理,进行常规饲养;GDNF-ADSC组、ADSC组、GDNF组、生理盐水组大鼠在右后肢大腿造成坐骨神经电损伤,伤后即刻向损伤神经表面分别局部注射100 μL过表达GDNF的ADSC悬液(细胞浓度l×10 7个/mL)、ADSC细胞悬液(细胞浓度1×10 7个/mL)、GDNF溶液(100 mg/L)、生理盐水.伤后第1～8周,每组取6只大鼠进行后肢步幅测量,并观察其伤后第8周的坐骨神经形态;伤后第4周,采用蛋白质印迹法检测各组剩余大鼠坐骨神经的GDNF蛋白表达量.对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、SNK检验. 结果 GDNF-ADSC组、ADSC组、GDNF组、生理盐水组大鼠在伤后各时相点后肢步幅均明显短于正常对照组(P值均小于0.05);GDNF-ADSC组大鼠在伤后第3～8周、ADSC组大鼠在伤后第3、5、7周、GDNF组大鼠在伤后第3、5、7、8周后肢步幅均明显长于生理盐水组(P值均小于0.05);伤后第4～8周,GDNF-ADSC组大鼠后肢步幅分别为(10.83 ±0.97)、(13.25±1.40)、(12.86±1.42)、(14.06±1.50)、(15.09±1.17)cm,明显长于ADSC组的(8.90±0.82)、(9.03±0.57)、(9.27±0.36)、(9.86±0.36)、(9.52±0.58)cm,和GDNF组的(8.87±0.69)、(8.51±1.18)、(9.34±0.87)、(9.76±0.67)、(9.50±1.22)cm(P值均小于0.05).伤后第8周,与正常对照组比较,生理盐水组大鼠坐骨神经有髓神经纤维数明显减少,GDNF-ADSC组、ADSC组、GDNF组有髓神经纤维数明显增加;GDNF-ADSC组、ADSC组、GDNF组、生理盐水组大鼠坐骨神经轴突直径明显缩短,髓鞘厚度明显增加(P值均小于0.05).GDNF-ADSC组大鼠坐骨神经有髓神经纤维数为(31.2±0.8)个,明显多于ADSC组的(23.7±2.7)个、GDNF组的(22.3±2.7)个、生理盐水组的(9.3±2.8)个(P值均小于0.05);轴突直径以上4组相近(P值均大于0.05);GDNF-ADSC组大鼠坐骨神经髓鞘厚度为(3.41±0.34) μm,较ADSC组的(2.64±0.37) μm及GDNF组的(2.41±0.34) μm增加(P值均小于0.05).伤后第4周,生理盐水组、ADSC组、GDNF组、GDNF-ADSC组大鼠坐骨神经GDNF蛋白表达量明显高于正常对照组(P值均小于0.05);GDNF-ADSC组大鼠GDNF蛋白表达量明显高于生理盐水组、ADSC组、GDNF组(P值均小于0.05). 结论 过表达GDNF蛋白的ADSC对大鼠坐骨神经电损伤后肢体运动功能的恢复及神经修复具有明显的促进作用.