氯化镧对肿瘤坏死因子α诱导的核因子κB抑制因子激酶β活化的调控作用

摘要：目的 分析氯化镧对TNF-α诱导的NF-κB抑制因子(IκB)激酶β(IKKβ)活化的调控作用. 方法 (1)体外培养Hela细胞,按照随机数字表法分为TNF-α对照组,以含20 ng/mLTNF-α的无血清RMPI 1640培养液恒温培养30 min;小剂量氯化镧+TNF-α组、中等剂量氯化镧+TNF-α组、大剂量氯化镧+TNF-α组,3组细胞分别以含5、25、100 μmol/L氯化镧的无血清RMPI1640培养液恒温培养4h后,加入含20 ng/mL TNF-α的无血清RMPI 1640培养液继续培养30 min;氯化镧对照组,以含100 μmol/L氯化镧的无血清RMPI 1640培养液恒温培养30 min;空白对照组,以无血清RMPI 1640培养液恒温培养30 min,各组样本数均为3.收集各组细胞,免疫细胞荧光染色观察NF-κB/p65蛋白转位情况.(2)另取Hela细胞,同上分为5组,即TNF-α对照组、小剂量氯化镧+TNF-α组、中等剂量氯化镧+TNF-α组、大剂量氯化镧+TNF-α组、空白对照组并行相同处理,各组样本数均为3,采用蛋白质印迹法检测胞核中NF-κB/p65蛋白表达以及胞质中IκBα、IKKβ与磷酸化IκBα、IKKβ(p-IκBα、p-IKKβ)蛋白表达;采用NF-κB/p65转录因子试剂盒检测胞核中NF-κB/p65蛋白与靶基因结合的活性,数据以吸光度值表示.对数据进行方差分析、LSD-t检验. 结果 (1)空白对照组胞质中NF-κB/p65表达较强;TNF-α对照组胞核中NF-κB/p65表达较强;氯化镧对照组胞质中NF-κB/p65较空白对照组减弱;3种剂量氯化镧+TNF-α组间比较,胞核和胞质中的NF-κB/p65表达量随着氯化镧浓度的升高而减弱,总体表达明显弱于TNF-α对照组.(2)空白对照组胞核中也有一定量的NF-κB/p65蛋白表达,TNF-α对照组胞核中NF-κB/p65蛋白表达强于空白对照组;3种剂量氯化镧+ TNF-α组间比较,胞核中NF-κB/p65蛋白表达随着氯化镧浓度升高逐渐减弱.TNF-α对照组IκBα表达水平较空白对照组明显下降,而p-IκBα明显上升;3种剂量氯化镧+TN F-α组间比较,随着氯化镧浓度的升高,IκBα表达水平逐步升高,而p-IκBα水平逐渐降低.IKKβ的表达在各组无明显差异.空白对照组p-IKKβ几乎不表达,TNF-α对照组p-IKKβ水平明显升高;3种剂量氯化镧+TNF-α组间比较,随着氯化镧浓度的升高,p-IKKβ水平逐渐下降.TNF-α对照组NF-κB/p65蛋白与靶基因结合的活性为0.39 ±0.03,明显高于空白对照组(0,t=-7.23,P＜0.01);小剂量氯化镧+TNF-α组、中等剂量氯化镧+TNF-α组、大剂量氯化镧+TNF-α组NF-κB/p65蛋白与靶基因结合的活性分别为0.17 ±0.03、0.15±0.03和0,均显著低于TNF-α对照组(t值分别为-6.54、-5.92、-7.23,P值均小于0.01). 结论 氯化镧能通过阻断Hela细胞中IKKβ磷酸化,进而阻断NF-κB信号通路的活化.