微孔化猪脱细胞真皮基质与大鼠骨髓间充质细胞对裸鼠皮肤附件细胞再生的作用

摘要：目的 观察微孔化猪ADM复合含有骨髓间充质于细胞(BMSC)的大鼠骨髓间充质细胞群对裸鼠部分皮肤附件细胞再生的作用. 方法 将1只清洁级健康小白猪处死,切取制作面积约20 cm×10 cm、0.3 mm厚断层真皮片,通过激光打孔、高渗盐溶液脱细胞、交联等处理制作激光微孔化猪ADM(LPADM),无孔猪ADM仅行脱细胞、交联等处理,进行外观、组织学、扫描电镜观察.将1只SD大鼠处死,取股骨和胫骨,分离培养骨来源的骨髓间充质细胞群,取第3代贴壁细胞进行成骨、成脂肪细胞分化实验之后将其接种于LPADM、无孔猪ADM上,构建骨髓间充质细胞-LPADM和骨髓间充质细胞-无孔猪ADM.取21只健康裸鼠随机区组分为骨髓间充质细胞-LPADM+无孔猪ADM组(简称A组,6只)、LPADM+刃厚皮片组(简称B组,6只)、骨髓间充质细胞-LPADM+刃厚皮片组(简称C组,6只)、骨髓间充质细胞-无孔猪ADM+刃厚皮片组(简称D组,3只),麻醉后在其背部正中做一2 cm×2 cm的全层皮肤缺损创面,达深筋膜,同时切取相同大小刃厚皮片备用,并分别移植相应材料覆盖创面 于移植术后5、7、14 d观察裸鼠局部情况及不良反应,各组分别处死1只裸鼠切取全部移植物,HE染色观察其组织结构;移植术后7、14 d透射电镜下观察相应复合物中新生皮肤附件情况. 结果 (1) LPADM、无孔猪ADM呈瓷白色,柔软、有弹性,组织学观察显示真皮基质未见细胞成分;扫描电镜示孔径中胶原纤维排列有序;LPADM还有微孔结构 (2)细胞传至第3代时,形态趋于一致,呈Fb样,生长较快.(3)诱导分化实验表明,细胞可向成骨细胞、成脂肪细胞分化.(4)移植术后5 d,A组无孔猪ADM局部干燥,D组皮片局部干燥坏死,A、D组均未见感染及炎症反应;B、C组移植皮片成活 移植术后7、14 d,A组表面的覆盖物局部色泽发黑,干燥发硬;D组皮片出现完全变黑干燥坏死,皮下可见淡黄色清亮渗液;A、D组均未见明显脓性分泌物.B、C组皮片外观与周围皮肤颜色接近.(5)移植术后5、7 d,A、B、C组真皮基质的微孔结构中已见血管化,其内可见有形红细胞;D组移植皮片部分干燥坏死.移植术后14 d,A、B、C组真皮基质的微孔结构中已完全血管化,其内可见大量的红细胞.纵切片中,A组微孔真皮基质成活,但与其上所覆盖的无孔猪ADM未紧密结合;B、C组皮片与真皮基质间连接紧密,皮片中均未见皮肤附属器,C组创面皮片与真皮基质交接处可见特殊的单层细胞.(6)D组移植皮片末能成活,故放弃电镜观察.移植术后7d,A、B、C组透射电镜图片未见明显差别.移植术后14 d,A、B组移植物中未见皮脂腺样及汗腺样细胞,也未见新生神经末梢,仅见Fb迁入.C组创面刃厚皮与真皮基质交接处可见大量新生毛细血管增生,Fb粗面内质网分裂增殖旺盛,可见新生的无髓神经末梢;在真皮基质浅层,出现单个游离的皮脂腺样及汗腺样细胞 结论 LPADM为骨髓间充质细胞群的迁移和分化提供了“干细胞龛”样微环境,联合刃厚皮片移植可在体诱导外源性BMSC分化,实现部分皮肤附件的重建.